Шарлотка из белков

Адреса: Park Road, Ballantyne, Plaza Midwood, South End (между Blaze и Bulgogi Box)

Меню из местных продуктов с безглютеновыми, вегетарианскими и веганскими блюдами согласно FODMAP рекомендации.

Диапазон цен:  Семейные обеденные наборы начинаются от 38 долларов США, индивидуальные основные блюда – от 5 долларов США.
Адрес: South End, предлагает доставку в любую точку Шарлотты и ее окрестностей

Предоставлено Chef Alyssa's Kitchen коробка 

Диапазон цен: Товары начинаются от 5,50 долларов США

Местоположение: Uptown и Edison Square Concord

Салат Don't Kale My Vibe от Chop & Chisel

Служба доставки веганских и органических блюд 

Диапазон цен:  Планы питания начинаются от 1 843 долларов США 92. На основе доставки

Этот контент был создан в сотрудничестве с OrthoCarolina.

История Просмотров:

Читать следующую историю

Белок фосфо-докинга 14-3-3 регулирует связанные с микротрубочками белки в ооцитах, включая хромосомный пассажир Borealin

. 2022 6 июня; 18 (6): e1009995.

doi: 10.1371/journal.pgen.1009995. электронная коллекция 2022 июнь.

Шарлотта Рептон ¹ , C Фиона Каллен ¹ , Мариана Ф. А. Коста ¹ , Христос Спанос ¹ , Юрий Раппсильбер ^{1 2} , Хироюки Окура ¹

Принадлежности

• ¹ Центр клеточной биологии Wellcome, Школа биологических наук, Эдинбургский университет, Эдинбург, Шотландия, Соединенное Королевство.
• ² Кафедра биоаналитики, Институт биотехнологии, Технический университет Берлина, Берлин, Германия.

• PMID: 35666772
• PMCID: PMC9203013
• DOI: 10.1371/journal.pgen.1009995

Бесплатная статья ЧВК

Шарлотта Рептон и др. Генетика PLoS. 2022 .

Бесплатная статья ЧВК

. 2022 6 июня; 18 (6): e1009995.

doi: 10.1371/journal.pgen.1009995. электронная коллекция 2022 июнь.

Авторы

Шарлотта Рептон ¹ , C Фиона Каллен ¹ , Мариана Ф. А. Коста ¹ , Христос Спанос ¹ , Юри Раппсильбер ^{1 2} , Хироюки Окура ¹

Принадлежности

• ¹ Центр клеточной биологии Wellcome, Школа биологических наук, Эдинбургский университет, Эдинбург, Шотландия, Соединенное Королевство.
• ² Кафедра биоаналитики, Институт биотехнологии, Технический университет Берлина, Берлин, Германия.

• PMID: 35666772
• PMCID: PMC9203013
• DOI: 10. 1371/journal.pgen.1009995

Абстрактный

Глобальная регуляция белков, связанных с веретеном, является критической в ​​ооцитах из-за отсутствия центросом и их очень большого цитоплазматического объема, но мало что известно о том, как это достигается помимо участия пути Ran-importin. Ранее мы обнаружили новый регуляторный механизм в ооцитах дрозофилы, в котором фосфо-докирующий белок 14-3-3 подавляет связывание микротрубочек Kinesin-14/Ncd вдали от хромосом. Здесь мы сообщаем о систематической идентификации белков, связанных с микротрубочками, регулируемых 14-3-3 из ооцитов дрозофилы. Белки из экстракта яичников осаждали совместно с микротрубочками в присутствии или в отсутствие ингибитора 14-3-3. С помощью количественной масс-спектрометрии мы идентифицировали белки или комплексы, способность которых связывать микротрубочки подавляется 14-3-3, включая хромосомный комплекс-пассажир (CPC), комплекс центрального шпиндлина и кинезин-14/Ncd. Мы показали, что 14-3-3 связывается с неупорядоченной областью бореалина, и это связывание регулируется по-разному двумя фосфорилированиями бореалина. Мутации в этих двух фосфо-сайтах нарушают нормальную локализацию бореалина и биориентацию центромер в ооцитах, показывая, что фосфо-регуляция связывания 14-3-3 важна для локализации и функции бореалина.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Цифры

Рис. 1. Идентификация белков, микротрубочки которых…

Рис. 1. Идентификация белков, связывание которых с микротрубочками регулируется 14-3-3.

(А) Рассеченные яичники…

(A) Рассеченные яичники гомогенизировали и очищали центрифугированием для получения растворимого экстракта. Его разделили на два и к одному добавили ингибитор 14-3-3 (R18). После полимеризации микротрубочек путем добавления таксола их осаждают центрифугированием через подушку из сахарозы. Осадки, содержащие микротрубочки и связанные с ними белки, анализировали с помощью количественной масс-спектрометрии без метки. (B) Вулканический график, показывающий кратность изменения количества каждого белка, обнаруженного во фракции микротрубочек в присутствии ингибитора 14-3-3, по сравнению с его отсутствием на оси X и значимостью (значение p) на оси Y. ось. Красная рамка содержит 47 белков, которые значительно увеличили связывание микротрубочек при ингибировании 14-3-3 (кратность изменения > 0,1,5 и p

Рис. 2. Биоинформатический анализ.

(А) Физический белок-белок…

Рис. 2. Биоинформатический анализ.

(A) Физические белок-белковые взаимодействия, известные среди 47 белков, которые значительно увеличили…

(A) Физические белок-белковые взаимодействия, известные среди 47 белков, которые значительно увеличивали их связывание с микротрубочками при ингибировании 14-3-3 (кратность изменения >1,5 и p

Рис. 3. Привязка 14-3-3 к неупорядоченному…

Рис. 3. Связывание 14-3-3 с неупорядоченной областью бореалина регулируется двумя фосфорилированиями.

(A) Схема доменной организации белков Borealin и Incenp. Известные белок-белковые взаимодействия обозначены двойными стрелками. Три предполагаемых сайта связывания 14-3-3 (красные кружки; Borealin S163 и Incenp S163 и S740) идентифицированы среди субъединиц CPC. Бореалин S163 расположен внутри внутренне неупорядоченной области между доменами, взаимодействующими с субъединицами CPC. МТ; микротрубочка. (B) Последовательности, окружающие предсказанные сайты связывания 14-3-3. Последовательность, окружающая бореалин, имеет большое сходство с Ncd S9.6 и Pav S744, содержащие серин в положении -2, который потенциально фосфорилируется киназой Aurora B. (C) Тестирование взаимодействия между фосфо-стыковочным белком 14-3-3 и неупорядоченной областью бореалина (Borr). Очищенный фрагмент бореалина, меченный MBP, инкубировали с PKD2 или без нее вместе с BSA. Добавляли GST-14-3-3ε и удаляли центрифугированием с использованием гранул глутатиона. Белки, связанные с гранулами, и несвязанную фракцию (супернатант) анализировали вестерн-блоттингом с использованием антитела к МВР. (D) MBP-Borealin (113–221) взаимодействует с GST-14-3-3ε способом, зависящим от фосфорилирования по S163. MBP-Borealin (113–221) и MBP-Borealin (113–221) с мутацией S163A инкубировали с киназой PKD2 человека или без нее перед вытягиванием глутатионовыми гранулами, связанными с GST-14-3-3ε. Вестерн-блоттинг белков, связанных с гранулами глутатиона, и несвязанных фракций (супернатантов) проводили с использованием антител к MBP и окрашивания общего белка. Количественная оценка и статистический анализ трех экспериментов показаны на рис. S4. (E) Дополнительное фосфорилирование с помощью Aurora B предотвращает взаимодействие PKD2-фосфорилированного MBP-Borealin (113–221) с GST-14-3-3ε. Бореалин (113–221) инкубировали только с киназой PKD2 человека, только с киназой Aurora B человека, с обеими киназами или без киназ, и тестировали на понижение с использованием GST или GST-14-3-3ε. Связанные или несвязанные белки анализировали вестерн-блоттингом с использованием антител к MBP или окрашиванием общего белка. PKD2-фосфорилированный MBP-Borealin (113–221) специфически взаимодействовал с GST-14-3-3ε, в то время как MBP-Borealin (113–221), дважды фосфорилированный PKD2 и Aurora B, не взаимодействовал. Количественная оценка и статистический анализ трехкратных экспериментов показаны на рис. S4. (F) Aurora B не может предотвратить взаимодействие между GST-14-3-3ε и PKD2-фосфорилированным MBP-бореалином (113–221) с мутацией S161A. MBP-Borealin (113–221) и MBP-Borealin (113–221) с мутацией S161A инкубировали с Aurora B человека или без него в присутствии киназы PKD2 человека перед вытягиванием глутатионовыми гранулами в сочетании с GST-14-3-3ε. Вестерн-блоттинг белков, связанных с гранулами глутатиона, и несвязанных фракций (супернатантов) проводили с использованием антител к MBP и окрашивания общего белка. Количественная оценка и статистический анализ трехкратных экспериментов показаны на S4 рис. 9.0003

Рис. 4. Нефосфорилируемые мутации ставят под угрозу локализацию…

Рис. 4. Нефосфорилируемые мутации ставят под угрозу локализацию бореалина и биориентацию центромер в ооцитах.

(A) Нефосфорилируемые мутации (S163A, S161A) уменьшают локализацию Borealin в веретене и центромерах. Флуоресценция наблюдалась в живых ооцитах, экспрессирующих GFP-меченые РНКи-резистентные мутанты дикого типа или нефосфорилируемые мутанты вместе с короткой шпилечной РНК (кшРНК) против эндогенного гена и красного хромосомного маркера, Rcc1-mCherry. Изображения были представлены для сравнения с использованием тех же условий захвата и регулировки контраста. (B) Суммарные сигналы GFP-Borealin и Rcc1-mCherry на веретене и центромерах над фоном были количественно определены. Красные линии указывают среднюю интенсивность сигнала. *** и ** обозначают РНК-интерференцию pborr, зондированную антителом против GFP и окрашивающую белок. (D) Нефосфорилируемые мутации (S163A, S161A) нарушают функцию Borealin в биориентации центромер. α-тубулин и перицентромер 3 (додекасателлит; наконечники стрел) визуализировали с помощью иммуноокрашивания в сочетании с гибридизация in situ в ооцитах borr RNAi с или без экспрессии мутантов дикого типа или нефосфорилируемых бореалиновых мутантов. (E) Частоты биориентации гомологичных центромер хромосомы 3. Два отдельных сигнала додеказателита вблизи обоих концов хромосомной массы рассматриваются как биориентированные центромеры, а один или два близко расположенных сигнала на одной стороне хромосомной массы - как биориентированные центромеры. рассматриваются как моноориентированные центромеры. *** и * обозначают p<0,001 и p<0,05 соответственно (точный критерий Фишера).

См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC

Похожие статьи

• 14-3-3 регуляция Ncd раскрывает новый механизм нацеливания белков на веретено в ооцитах.

  Бивен Р., Бастос Р.Н., Спанос С., Ромэ П., Каллен С.Ф., Раппсилбер Дж., Гит Р., Гошима Г., Окура Х. Бивен Р. и др. Джей Селл Биол. 2017 2 октября; 216(10):3029-3039. doi: 10.1083/jcb.201704120. Epub 2017 31 августа. Джей Селл Биол. 2017. PMID: 28860275 Бесплатная статья ЧВК.

• Новый путь зарождения микротрубочек для сборки мейотического веретена в ооцитах.

  Роме П., Окура Х. Роме П. и др. Джей Селл Биол. 2018 1 октября; 217(10):3431-3445. doi: 10.1083/jcb.201803172. Epub 2018 7 августа. Джей Селл Биол. 2018. PMID: 30087124 Бесплатная статья ЧВК.

• Комплекс хромосомного пассажира необходим для индуцированной хроматином стабилизации микротрубочек и сборки веретена.

  Sampath SC, Ohi R, Leismann O, Salic A, Pozniakovski A, Funabiki H. Sampath SC и др. Клетка. 2004 г., 23 июля; 118 (2): 187–202. doi: 10.1016/j.cell.2004.06.026. Клетка. 2004. PMID: 15260989

• Бореалин направляет рекрутирование CPC к хромосомам ооцитов и движение к микротрубочкам.

  Ван Л.И., ДеФоссе Т., Джанг Дж.К., Батталья Р.А., Вагнер В.Ф., МакКим К.С. Ван ЛИ и др. Джей Селл Биол. 2021 7 июня; 220(6):e202006018. doi: 10.1083/jcb.202006018. Джей Селл Биол. 2021. PMID: 33836043 Бесплатная статья ЧВК.

• Сборка веретена и сегрегация хромосом требует белков центрального веретена в ооцитах дрозофилы.

  Das A, Shah SJ, Fan B, Paik D, DiSanto DJ, Hinman AM, Cesario JM, Battaglia RA, Demos N, McKim KS. Дас А и др. Генетика. 2016 Январь; 202(1):61-75. doi: 10.1534/genetics.115.181081. Epub 2015 12 ноября. Генетика. 2016. PMID: 26564158 Бесплатная статья ЧВК.

Посмотреть все похожие статьи

использованная литература

1. 1. МакКим К.С., Хоули Р.С. Хромосомный контроль мейотического деления клеток. Наука (80-). 1995; 270: 1595–1601. doi: 10.1126/наука.270.5242.1595 - DOI - пабмед
2. 1. Кавацца Т. , Вернос И. Путь RanGTP: от ядерно-цитоплазматического транспорта до сборки веретена и далее. Front Cell Dev Biol. 2016;3. дои: 10.3389/fcell.2015.00082 - DOI - ЧВК - пабмед
3. 1. Голубцова З., Блейни М., Элдер К., Шух М. Склонная к ошибкам сборка веретена, опосредованная хромосомами, способствует дефектам сегрегации хромосом в ооцитах человека. Акушерство Gynecol Surv. 2015; 70: 572–573. doi: 10.1126/science.aaa9529 - DOI - ЧВК - пабмед
4. 1. Шух М.

      ---

      Learn more

      • 
        Плод щавеля
      • 
        Каша из ячневой крупы на воде рецепт
      • 
        Спагетти наполетано что это
      • 
        Как правильно хранить мед
      • 
        Компот из яблок и винограда в кастрюле на каждый день
      • 
        Можно ли замораживать имбирь
      • 
        Лывжа из говядины по осетински рецепт с фото
      • 
        Как сделать вино из забродившего варенья в домашних условиях
      • 
        Как называются маленькие соленые огурчики
      • 
        Как сварить кашу из тыквы с пшеном на молоке
      • 
        Для чего нужны кухонные ножницы